大鼠微量蛋白(mALB)酶联免疫分析（ELISA）

试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

药品名称：

通用名：大鼠微量蛋白(mALB)酶联免疫诊断试剂盒

使用目的：

本试剂盒用于测大鼠血清、血浆、或其它相关组织液中微量蛋白(mALB)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠微量蛋白(mALB)水平。用纯化的大鼠微量蛋白(mALB)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入微量蛋白(mALB)，再与 HRP 标记的抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的微量蛋白(mALB)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度

（OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠微量蛋白(mALB)浓度。

试剂盒组成

标本要求

1. 标本采集后尽早进行实验。
2. 不能检测含NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
3. 可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。

操作步骤

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在、第二孔中分别加标准品 100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液 50μl， 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。（稀释后各孔加样量都为 50μl， 浓度分别为 180μg/L，120μg/L  ，60μg/L，30μg/L，15μg/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样品稀释度为 5 倍）。加样时将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

1. 配液：将 20 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20 倍稀释后备用
2. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。
3. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
4. 温育：操作同 3。
5. 洗涤：操作同 5。
6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.
7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
8. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，其 OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

注意事项

1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3. 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4. 请每次测定的同时做标准曲线，建议做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n 倍）后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准
7. 底物请避光保存。
8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9. 本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。

检测范围：

10μg/L

规格：

96 人份/盒

保存条件及有效期

1. 试剂盒保存：；2-8℃。
2. 有效期：6 个月