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miRNA cDNA第--链合成试剂盒说明书
点击次数：1524 更新时间：2020-02-24
miRNA cDNA第--链合成试剂盒说明书
miRNA cDNA Kit
miRNA cDNA第--链合成试剂盒
目录号：K2141
保存条件：-20℃保存。
组分说明
Cat. No. K2141
Kit Size 25 次
1mM Tris，PH8.0 1 ml
E. coli Poly(A) Polymerase(5U/μl) 15 μl
10×Poly(A) Polymerase Buffer 80 μl
10mM ATP 15 μl
25μM RT primer 90 μl
5×RT Buffer 120 μl
超纯dNTPs(10mM each) 30 μl
SuperRT Reverse Transcriptase 15 μl
RNase-Free Water 1 ml
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途
产品简介
本试剂盒采用在miRNA 3’末端加多聚A尾的方法来使miRNA具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Universal tag通用逆转录引物进行逆转录反应，终合成miRNA对应
的第--链cDNA。
miRNA cDNA第--链合成试剂盒包含miRNA 3’末端Poly(A)尾修饰过程及修饰后逆
转录过程需要的全部试剂。该试剂盒具有非常高的 Poly(A)修饰和逆转录效率，可以从
1 ng-2 μg的total RNA中有效获得miRNA对应的cDNA第--链。并且操作简便、快捷，
可以用于从一个反应合成的cDNA中同时检测多种miRNA，不仅减少了误差、节约了样
品，同时还实现了检测的高通量。
备注：本试剂盒须与miRNA荧光定量检测试剂盒（K2142）配套使用。
自备实验材料：1 ng-2 μg的总 RNA，或0.1 ng-1 μg的小分子RNA。
注意事项
预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2．玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡
10分钟，用水*冲洗后高压灭菌。
3．配制溶液应使用无RNase的水。
4．操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
操作步骤
A．miRNA加Poly(A)尾的过程：
1．首先根据所用RNA的量，按如下公式，用1 mM Tris（PH8.0）来稀释10 mM ATP：
ATP稀释系数=5000/__ng的总RNA
例：如果总RNA的起始用量为100 ng，那么ATP稀释系数=5000/100=50。即将ATP
稀释50倍（1 μl的10 mM ATP加49 μl的1 mM Tris，PH8.0）。
2．向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入以下试剂至总体积25 μl。
试剂 体积 终浓度
total RNA* X μl 可达2 μg
10×Poly(A) Polymerase Buffer 2.5 μl 1×
第“1”步中稀释好的ATP 1 μl —
E. coli Poly(A) Polymerase（5U/μl） 0.5 μl 2.5 U
RNase-Free Water up to 25 μl —
*反应中使用的total RNA必须含有小分子RNA。
此过程也可以直接使用小分子RNA（建议加入量为2-5 μl。请根据目的miRNA的丰
度来确定加入量）。
3．轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。37℃，孵育15分钟。此过程结
束后，立刻进行第--链cDNA的合成，或于-20℃暂存。如需长期保存，建议存放于
-80℃。
B．修饰后的miRNA cDNA第--链合成的过程：
1．向冰浴中预冷的无RNase反应管中加入下表中试剂，至终体积20 μl：
试剂 体积
上述Poly(A)反应液 4 μl
超纯dNTPs(10mM each) 1 μl
25μM RT primer 3 μl
5×RT Buffer 4 μl
SuperRT Reverse Transcriptase 0.5 μl
RNase-Free Water 7.5 μl
2．轻轻混匀上述反应液，短暂离心将液体收集于管底。42℃，孵育50分钟。
3．85℃，孵育5分钟，终止反应。合成的 cDNA反应液可以直接进行荧光定量检测实
验，也可以于-20℃保存备用。
相关产品信息
目录号 产品名称
K0627 miRNA提取试剂盒
K2141 miRNA cDNA第--链合成试剂盒
K2142 miRNA荧光定量 PCR检测试剂盒
试剂盒免费代检测
试剂盒免费代检测
