SuperQuickRT cDNA第--链合成试剂盒说明书

SuperQuickRT cDNA Kit

（For Real-time PCR）

SuperQuickRT cDNA第--链合成试剂盒

（For Real-time PCR）

目录号：K2381

保存条件：-20℃。

规格说明

     Cat. No.                   K2381B      K2381

     Kit Size                    25         100

     SuperQuickRT Mix              12.5 μl      50 μl

     5×RT Buffer（For Real-time PCR）   55 μl       220 μl

     Primer Mix                  27.5 μl     110 μl

     dNTP Mix (2.5 mM Each)          55 μl       220 μl

     RNase-Free Water              1 ml        1 ml

本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本产品是为Real-time  RT-PCR研发的快速逆转录试剂，其包含从RNA模板逆转录

成cDNA第--链所需的全部试剂，优化的反应体系为快速逆转录酶提供更可靠的反应条

件。SuperQuickRT逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应，

15分钟即可完成荧光定量 PCR模板cDNA第--链合成。另外，逆转录反应温度可以提

高到50 ºC，可通读GC含量高和二级结构复杂的RNA模板。

产品特点

1．快速：42 ºC，15min可完成cDNA第--链合成。

2．反转录效率高：反转录效率高于90%。

3．灵敏度高：pg级模板也可以得到高质量的cDNA。

4．通读复杂模板：GC含量高和二级结构复杂模板。

注意事项

1．在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议操作人

   员带口罩和一次性手套并经常更换手套，使用专门的仪器和耗材。

2．逆转录体系配制在冰上进行操作，防止RNA发生降解。试剂盒的酶使用后尽快置于

   -20 ºC保存，并尽量避免反复冻融。

3．Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成，也可根据实验需要选用Oligo-dT

   Primer或Gene Specific Primer。

4．反应体系可倍比放大，10 μl反应体系可zui大使用1μg总RNA。

5．对于二级结构复杂的RNA模板，建议在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暂离心后进行下一步操作。

操作步骤

1．将模板RNA在冰上解冻；将试剂盒组分在室温解冻后立刻置于冰上，使用前将每种

   溶液涡旋振荡混匀，并经短暂离心后使用。

2．根据以下表格配制反应体系，涡旋震荡混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。

试剂                 10 μl反应体系           终浓度

dNTP Mix (2.5 mM Each)         2 μl               500 μM Each

Primer Mix                 1 μl

                         1）

RNA Template                X μl              10 pg～1 µg2）

5×RT Buffer（for Real-time PCR）  2 μl              1×

SuperQuickRT Mix             0.5 μl

RNase-Free Water             up to 10 μl

   注意：1）根据实验需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建议10 μl 反应体系加入Oligo-dT Primer 25 pmol，或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。

2）如果总RNA量大于1 µg，请按比例扩大反应体系。

3．42℃孵育15分钟。

   注意：对于二级结构复杂或GC含量高的模板，可以提高逆转录温度至50℃，增强逆转录效率。

4．85℃孵育5分钟，使逆转录酶失活。

5．短暂离心后置于冰上，再进行后续Real-time PCR检测，如果需要长时间保存，请置于-20℃。

注意：进行Real-time PCR反应时，逆转录产物的加量应不超过PCR反应总体积的1/10。

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