Super-Bradford 蛋白定量试剂盒说明书
Super-BradfordProteinAssayKit
Super-Bradford 蛋白定量试剂盒说明书
Cat.No. K0013
保存：2-8℃
组分说明
Catalogno. K0013
KitSize 800 次/微孔，100 次/试管
BradfordProteinAssayReagent 200ml
BSA 标准液（2mg/ml） 2ml
产品简介
Bradford 法是简dan和快速的比色蛋白定量方法。这一方法基于考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在 465-595nm 处有大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测 595nm 的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的 Bradford 方法进行了改良，大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为 100-1,500 μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物 1 小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。
注意事项
1. 如待测样品中含较多的干扰物质（具体见附表 1），可采用 BCA 蛋白定量试剂盒（K0014）或其他蛋白定量产品。
2. BSA 标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致（可用 1×PBS 或 0.9%生理盐水进行稀释）。
3. 本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，所测蛋白分子量必须大于 3kD。
4. 操作中请佩戴手套。
5. 本产品仅限科研使用。
操作步骤（以大肠杆菌表达系统为例）
1. 稀释 BSA 标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释 BSA 标准品。
管号 稀释液用量（μl） BSA标准品用量（μl） BSA标准品终浓度（μg/ml）
A 0 100 2,000
B 50 150 1,500
C 200 200 1,000
D 200 200（从C管中取） 500
E 200 200（从D管中取） 250
F 200 200（从E管中取） 125
G 200 0 0(空白)
2. 试管检测（检测范围：100-1500 μg/ml）
1）按上表稀释标准品，将 30 μl 稀释好的 BSA 标准品分别加到作好标记的试管中。
2）取干净的试管，分别加入 30 μl 待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做 2-3 个平行反应。
3）向步骤 1）和步骤 2）的试管中各加入 1.5mlBradfordProteinAssayReagent，充分混匀，室温放置 10 分钟。
4）用分光光度计测定 595nm 处的吸光值。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制得曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
3. 微孔检测（检测范围：100-1500 μg/ml）
1）将按表 1 稀释好的 A-GBSA 标准品和待测蛋白样品（原液或稀释液）各 5 μl 分别加到作好标记的 96 孔板微孔中。
2）每孔加入 250 μlBradfordProteinAssayReagent，充分混匀，盖上 96 孔板盖，室温放置 10 分钟。
4）用酶标仪测定 595nm 处的吸光值。
5）绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制得曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6）如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。
附表
附表 1. 干扰物质表
化合物 耐受浓度 化合物 耐受浓度
缓冲液 去垢剂和变性剂
乙酸盐 0.6M Brij35 干扰
甘氨酸 0.1M 脱氧胆酸纳 0.25%
HEPES 0.1M CHAPS 1%
MES 0.7M NP-40 干扰
MOPS 0.2M 辛葡糖 2%
Na + -柠檬酸 50mM SDS 0.1%
PIPES 500mM Tween-20 干扰
磷酸钠/磷酸钠 1M TritonX-100 0.1%
乙酸钠 0.6M 糖类
Tris 2M 蔗糖 1mM
盐类 螯合剂
硫酸铵 1M EDTA 100mM
NaCl 1M EGTA 50mM
尿素 6M
极性化合物 其他
甘油 99% HCl 0.1M
还原剂 NaOH 0.1M
β-巯基乙醇 1M NAD 1mM
DTT 1M 苯 5%
