注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

规格：100T/48S

产品说明：

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、蒸馏水。

一、测定操作表

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 470nm，蒸馏水调零。

2、操作表

	对照管	测定管	标准管	空白管
样本待测液（µL）	60	60
标准溶液（μL）			60
蒸馏水（μL）				60
试剂一（µL）	15	15	15	15
混匀，室温静置 5min
试剂二（µL）		15	15	15
混匀，室温静置 5min
试剂三（µL）	120	120	120	120
60%乙醇（µL）	105	90	90	90
混匀，37℃水浴 45 min，10000g，10min 离心取上清，取 200µL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中测定 A470。计算ΔA=A 测定-A 对照，ΔAˊ=A 标准-A 空白。

1、标准曲线绘制

以单宁酸浓度为横坐标，ΔAˊ为纵坐标绘制标准曲线 y=kx+b，将ΔA 带入方程求得 x； 2、按样本鲜重计算

类黄酮含量（mg/g 鲜重）= x×V 提取÷W=x÷W 3、按样本蛋白浓度计算

类黄酮含量（mg/ mg prot）= x×V 提取÷(Cpr×V 提取) = x÷Cpr

V 提取：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

1、 OD 值大于 0.4，样品适当稀释再测定，注意计算公式里乘以稀释倍数。

2、显色完成后立即测定，2 小时后吸光值会下降。

实验代做服务：