微量法

测定意义

*磷是土壤中可被植物吸收的磷组分，包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷，土壤中*磷是限制植物生长主要因子之一。

测定原理

用弱碱性提取碱溶性磷和吸附态磷，用钼锑抗比色法测定。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、震荡仪。

试剂组成和配制

提取液：液体 105mL×1 瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 0.5mL 蒸馏水溶解。试剂二：液体 1mL×1 支，4℃保存。

工作液：临用前将试剂一和试剂充分混匀，加 48.5mL 蒸馏水混匀。

样本处理

新鲜土样风干，过20目筛，按照土壤质量（g）：提取液体积(mL)为1：20的比例（建议称取约0.05g土样，加入1mL提取液），振荡提取1h，10000g ，25℃离心10min，取上清液待测。

测定操作表

	空白管	测定管
样本（μL）		20
提取液（μL）	60	40
工作液（μL）	80	80
H2O（μL）	60	60
充分混匀，25℃静置 30min
于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸馏水调零，测定 700nm 处吸光值 A，分别记为 A 空白管和 A 测定管，△A=A 测定管-A 空白管

计算公式

a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.237x-0.2018，R2=0.9992

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.2018）÷ 0.237×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 42.19×（△A+0.2018）÷W

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

b. 用 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y=0.1185x-0.2018，R2=0.9992

*磷含量（mg/kg）=（△A+0.2018）÷ 0.1185×V 反总÷（W×V 样÷V 样总）

= 84.38×（△A+0.2018）÷W

V 反总：反应总体积，0.2mL；V 样：反应体系中加入样本体积，0.02mL；V 样总：加入提取液体积，1mL，W：样本质量，g

实验代做服务：