乳酸（LA）含量检测试剂盒说明书

微量法

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

规格：100T/48S

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体20mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。临用前加入0.6ml试剂一充分溶解。可分装后-20℃保存， 避免反复冻融；

试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加入6mL试剂一充分溶解；可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。 临用前每瓶加入6mL 试剂一混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融；

试剂五：液体3mL×1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.04mL提取液配成100µmol/mL 的标准溶液；

显色液的配制：临用前根据用量按照试剂三（V）：试剂四（V）：试剂五（V）=1：1：0.5的比例充分混匀，现配现用；

产品说明：

乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原特异性底物， 在450nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：

天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理：

a.组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min后取上清待测。

b.细胞：按照细胞数量（106个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃， 12000g离心10min后取上清待测。

c.血清（浆）：取100µL血清（浆）加入0.9mL提取液，4℃ 12000g离心10min后取上清待测。

二、测定操作

1、分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至450nm，分光光度计用蒸馏水调零。

2、标准液的稀释：将100µmol/mL 的标准溶液用蒸馏水稀释为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0µmol/mL的标准溶液待测。

3、加样表：

测定管 对照管 标准管 空白管

样品（µL） 10 10 - -

标准品（µL） - - 10 -

蒸馏水（µL） - 10 - 10

试剂一（µL） 40 40 40 40

试剂二（µL） 10 - 10 10

工作液（µL） 140 140 140 140

于 37℃准确反应 30min。于 450nm 处测定吸光值，分别记为 A 测定管，A 对照管，A 标准管，A 空白管，计算∆A 测定=A 测定管-A 对照管；∆A 标准= A 标准管-A 空白管。

三、乳酸含量的计算：

1、标准曲线的绘制

以各标准溶液浓度为x轴，以其对应的吸光值（∆A标准）为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程

y=kx+b，将∆A测定带入公式中得到x（µmol/mL）。2、乳酸含量计算

（1）按照蛋白含量计算

LA含量（µmol/mg prot）=x×V 样÷V 样÷Cpr =x÷Cpr

（2）按照样本质量计算

LA含量（µmol/g 鲜重）=x×V 样÷(V 样÷V 样总×W)=x ÷W。

（3）按照细胞数量计算

LA含量（µmol/106 cell）=x×V 样÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=x ÷细胞数量

（4）按照液体体积计算

LA含量（µmol/mL）= 10×x。

V样品：加入的样品体积，0.01mL。：W：样本质量，g/mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL， 蛋白浓度需自行测定； V提取液：加入的提取液体积，1mL；细胞数量，5×106个；V液体：液体样本体积，0.1mL。

注意事项：

1. 若测定吸光值∆A大于大浓度标准品OD值，请将样品体积进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

实验代做服务：