洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤，却是决定成败的关键。洗涤的目的是洗去反应液中没有与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附作用属普遍性的，因此在ELISA测定的反应过程中应尽量避免非特异性吸附，在洗涤时应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。

　　洗涤如不*，特别在后一次，如有酶结合物的非特异性吸附，将使空白值升高。另外，在间接法中如血清标本内的非特异性lgG吸附在固相上而未被洗净，也将与酶标抗抗体作用而产生干扰。

　　ELISA板的洗涤一般可采用以下步骤:①吸干反应液;②将洗涤液注满板孔;③放置2~3min，略作摇动;④吸干孔内液。也可倾去液体后在吸水纸上拍干。洗涤的次数一般为3~4次，有时甚至需洗5~6次。

　　洗涤方法可用手动或全自动冲洗，不论使用哪种方法，都要满足下列条件:①每个孔都应充满洗涤液；②每步冲洗后都要*去净洗涤液；③冲洗次数要足够；④足够的浸泡时间。.

　　一般情况下，浸泡时间长和增加冲洗次数可以降低相对标准偏差(RSD)，但过度冲洗则降低阳性血清与阴性血清的吸光度比值，在自动冲洗时常有此种现象。当用自动注意冲洗器的管是否有堵塞。如果用自动或半自动冲洗器，在冲洗过程中可以观察到酶标板，从而可以保证洗涤的效果。

　　洗涤液中的成分不同也会影响ELISA检测结果。洗涤液可以是:（1）蒸馏水；（2）水+0.05%Tween20；（3）蒸馏水+0.5%BSA；（4）蒸馏水+0.05%Tween20+0.5%BSA。结果表明洗涤液中加Tween20和BSA时洗涤的效果相同，同时使用Tween20和BSA对检测结果并无明显改善，但仅用蒸馏水洗涤时会使弱阳性血清反应转为阴性。