GENMED血液维生素A高效液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

GENMED血液维生素A高效液相色谱法定量检测试剂是一种旨在通过抗氧化处理和有机溶剂萃取，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（325nm波长）检测分析，分离出维生素A即视黄醇波峰，以定量测定样品中维生素A含量的权*#威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于人体、动物等血液（血浆、血清）样品中维生素A及其衍生物，例如视黄醇（retinol）、视黄醛（retinaldehyde）、视黄酸（retinoic acid）、3-脱氢视黄醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）、维生素 A 棕榈酸酯（retinol palmitate）和维生素A乙酸酯（retinol acetate）的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

视黄酸类（retinoid）是维生素A（Vitamin A）及其相关衍生物的统称，其中包括视黄醇（retinol）、视黄醛（retinaldehyde）、视黄酸（retinoic acid）等。维生素A的结构形式包括视黄醇（vitamin A1）及其酯类、3-脱氢视黄醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）及其酯类，视黄醛、视黄酸、新维生素A（neovitamin A）等。维生素A在肝脏脂肪组织里以酯类形式储存，维生素 A 棕榈酸酯（retinol palmitate）和维生素A乙酸酯（retinol acetate），占5%，而95%以水解形式，在体内循环。维生素A在维护动物和人体眼睛、呼吸和生殖系统的上皮组织，以及骨发育的正常功能方面起着主要作用。维生素A缺陷将导致眼球干燥症（xerophthalmia）、皮肤异常、易发感染；维生素A中毒会出现困倦（drowsiness）、颅压（cranial pressure）增加、血钙过高（hypercalcemia）、脱发、高胡萝卜素血症（hypercarotenemia）等。通过抗氧化处理和有机溶剂萃取，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（325nm波长）检测分析，分离出维生素A，即视黄醇波峰，以定量分析维生素A的含量。

产品内容

GENMED缓冲液（Reagent A）       10毫升

GENMED萃取液A（Reagent B）  20毫升

GENMED萃取液B（Reagent C）       40毫升

GENMED去干扰液（Reagent D）       20毫升

GENMED溶解液（Reagent E）        5毫升

GENMED流相液（Reagent F）      500毫升

GENMED标准液（Reagent G）      500微升

产品说明书      1份

保存方式

保存GENMED缓冲液（Reagent A）、GENMED萃取液A（Reagent B）和GENMED标准液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，GENMED标准液（Reagent G）避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；GENMED萃取液B（Reagent C）、GENMED去干扰液（Reagent D）和GENMED流相液（Reagent F）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

2毫升离心管：用于样品操作的容器

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

（微型）台式离心机：用于样品处理

干式培养箱或离心浓缩仪：用于样品干化

高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定

实验步骤

• 样品准备 

• 血浆样品准备

• 准备好EDTA抗凝管
• 抽取1毫升血液，置于抗凝管里
• 放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为700g（或3000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
• （选择步骤）即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
• 移取500微升血浆到15毫升锥形离心管
• 加入500微升GENMED缓冲液（Reagent A），混匀
• 加入1毫升GENMED萃取液A（Reagent B）
• 涡旋震荡20秒
• 加入2毫升GENMED萃取液B（Reagent C）
• 涡旋震荡1分钟
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为1000g 
• 移取2毫升上层液相到2毫升离心管
• 放进40℃干式培养箱晾干或离心浓缩仪挥干
• 加入100微升GENMED溶解液（Reagent E），混匀，避免光照
• 即刻进行后续高效液相色谱分析

• 血清样品准备

• 准备好不含抗凝剂的储存管 
• 抽取1毫升血液，置于储存管里
• 室温下，静置30分钟，直至血液凝结
• 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为2000g（或5000RPM，例如eppendorf 5415）
• 小心移取上层黄色液体到新的1.5毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
• （选择步骤）即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
• 移取200微升血清到新的2毫升离心管
• 加入200微升GENMED缓冲液（Reagent A），混匀
• 加入400微升GENMED萃取液A（Reagent B）
• 涡旋震荡20秒
• 加入800微升GENMED去干扰液（Reagent D）
• 涡旋震荡1分钟
• 放进台式离心机离心5分钟，速度为8500g
• 移取800微升下层液相到2毫升离心管
• 放进40℃干式培养箱晾干或离心浓缩仪挥干
• 加入100微升GENMED溶解液（Reagent E），混匀，避免光照
• 即刻进行后续高效液相色谱分析

• 测定准备

• 开启仪器预热15分钟
• 根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数

• 使用GENMED流相液（Reagent F）运行1次（30毫升），以达到色谱柱均衡和温度稳定

• 标准样品配制

• 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
• 分别加入100微升GENMED溶解液（Reagent E）到1至5号管
• 移取100微升GENMED标准液（Reagent G）到1号管，混匀
• 小心移取100微升1号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到2号管，混匀
• 小心移取100微升2号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到3号管，混匀
• 小心移取100微升3号管稀释的GENMED标准液（Reagent G）到4号管，混匀
• 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

四、色谱分析

• 将上述配制的GENMED标准液（Reagent G）和待测样品放进30℃培养箱预热
• 每次（每个样品）注射100微升
• 每次（每个样品）运行10至20分钟
• 获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录
• 全部运行完成，使用适量的GENMED流相液（Reagent F）清洗色谱柱

五、计算含量

• 方法一：通过仪器中的软件进行测算
• 方法二：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为波峰面积（peak area）；横座标（X轴）为标准视黄醇浓度（微克/毫升），根据标准曲线获得样品对应视黄醇浓度（微克/毫升）
• 方法三：公式计算（选择单一浓度的标准液）

样本视黄醇浓度（微克/毫升）=【样本波峰面积（peak area）X标准视黄醇浓度】÷对应标准视黄醇浓度的波峰面积

 注意事项

• 本产品为20次操作 
• 本产品可以用于视黄醇（retinol）、视黄醛（retinaldehyde）、视黄酸（retinoic acid）、3-脱氢视黄醇（3-dehydroretinol；vitamin A2）、维生素 A 棕榈酸酯（retinol palmitate）和维生素A乙酸酯（retinol acetate）等的检测
• 本产品检测范围是0.3至50毫克/升
• 操作时，须戴手套
• 试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜
• 样品避免光照
• 样品建议新鲜采集，避免溶血
• GENMED萃取液B（Reagent C）、GENMED去干扰液（Reagent D）和GENMED流相液（Reagent F）具有腐蚀性，注意操作安全
• 色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等
• 用户可以使用已知浓度的GENMED标准液（Reagent G）作为内参标准加入到样品中，检测回收率（recovery）
• 维生素A的HPLC参考图谱如下

• 维生素A及其衍生物的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的GENMED标准液（Reagent G）实际出峰为准
• 本公司提供系列维生素检测试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号 名称 规格

GMS19066.2.2 GENMED血液维生素A高效液相色谱法定量检测试剂盒 20次

GMS19066.2.2A GENMED缓冲液（Reagent A）     100毫升

GMS19066.2.2B GENMED萃取液A（Reagent B） 100毫升

GMS19066.2.2C GENMED萃取液B（Reagent C）      100毫升

GMS19066.2.2D GENMED去干扰液（Reagent D） 100毫升

GMS19066.2.2E GENMED溶解液（Reagent E） 50毫升

GMS19066.2.2F  GENMED流相液（Reagent F） 500毫升

GMS19066.2.2G  GENMED标准液（Reagent G）      1毫升

试剂盒订购信息

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