RIPA裂解液（强）说明书
RIPA Lysis Buffer
目录号：K2333
保存条件：4℃保存。
组分说明
Cat. No. K2333
Volume 100 ml
本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途产品简介
RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液，主要用于从动物组织和哺乳
动物细胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度
可以分为强、中、弱三类，具体特点和差异请参考附表2，可根据实验需求选择相应产
品。RIPA裂解液（强）可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白，提取的蛋白可应用
于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
RIPA裂解液（强）的主要成分为50mM Tris（pH 7.4），150mM NaCl，1%Triton
X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS以及sodium orthovanadate，sodium
fluoride，EDTA，leupeptin等多种抑制剂，可有效抑制蛋白降解。
注意事项
1．为防止蛋白降解，所有的操作尽量在冰上进行。
2．使用RIPA裂解液得到的蛋白样品，可采用BCA法进行蛋白定量，以测定蛋白浓度。
产品可单独向本公司订购，如：YJ0014 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的
去垢剂，不能用Bradford法进行蛋白定量。
3．建议在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，以防止蛋
白降解，或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购，如：K2200 蛋白酶抑制剂混合物，K2383 磷酸酶抑制剂混合物。
4．若需获得更高浓度的蛋白，应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5．对于培养瓶中的贴壁细胞，推荐先使用常规方法消化细胞，再参考悬浮细胞蛋白提
取步骤操作。
6．对于离心获得的细胞，若不确定细胞体积，可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用
量。如5×106个Hela细胞约需加入500 μl RIPA裂解液，以此类推。
操作步骤
I 细胞样品
· 贴壁细胞蛋白抽提
1．小心倾去贴壁细胞的培养液。
2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请先使用预冷的
PBS漂洗细胞。
3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），试剂使用量请参考
附表1，在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
表 1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表
细胞培养板类型或培养面积 RIPA 裂解液使用量
100 mm* 500-1,000 µl
60 mm 250-500 µl
6 孔培养板 200-400 µl /孔
24 孔培养板 100-200 µl /孔
96 孔培养板 50-100 µl /孔
* 对于100 mm培养板培养的107个细胞 (50 mg)可裂解获得约3 mg总蛋白（细胞类型不同略有差异）。
4．将裂解液转移至新的离心管中，冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
· 悬浮细胞蛋白提取
1．悬浮细胞2,500×g，离心5分钟，弃去上清。
2．可选步骤：若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质，请使用PBS漂洗
细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟，弃去上清。
3．加入适量RIPA裂解液（使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂），每5×106细胞加入约
200-500 µl RIPA裂解液，吹打均匀。
4．冰上放置20分钟，使细胞充分裂解。
5．14,000×g离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
II 组织样品
1．取适当的RIPA裂解液，在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2．称量实验组织的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后将组织剪成细
小碎片，用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物，可适当减少组织蛋白
抽提试剂使用量。
3．冰上孵育20分钟，使细胞充分裂解。
4．14,000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中，进行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为基因组。
相关产品信息
目录号 产品名称
K2333 RIPA裂解液（强）
K2334 RIPA裂解液（中）
K2335 RIPA裂解液（弱）
K2336 RIPA裂解液（强中弱套装）
K2337 SDS裂解液
K0002/K0889 哺乳动物蛋白抽提试剂/哺乳动物蛋白抽提试剂盒
K0004/K0891 组织蛋白抽提试剂/组织蛋白抽提试剂盒
K0199B Nc-细胞核/浆蛋白抽提试剂盒
K2200 蛋白酶抑制剂混合物
K2383 蛋白磷酸酶抑制剂混合物
K0014 BCA蛋白定量试剂盒
K0022 SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
K0023 ProteinShow-G250蛋白快速染色试剂
实验代做服务：
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