猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书

【产品名称】

通用名称：猪瘟病毒抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）

英文名称：Diagnostic Kit For Classical Swine Fever Virus Antibody（CSFV Ab）,ELISA

【规格】

96T×2/盒

【用途】

用于检测猪血清中猪瘟病毒抗体，适用于对猪场猪瘟疫苗免疫状况的评价以及感染猪的血清学诊断。

【检验原理】

本试剂盒应用固相酶联免疫吸附试验（ELISA）原理，由包被有高纯度的猪瘟病毒重组抗原的微孔反应板、辣根过氧化物酶标记的抗猪IgG及其它试剂配套组成。其反应机理为包被抗原与样本中的CSFV-Ab结合，再与酶标抗猪IgG抗体形成“包被抗原+CSFV-Ab+酶标抗猪IgG抗体"复合物，加入显色剂，通过酶催化反应显色。显色深浅与CSFV-Ab的量成正比，当样本反应显色后，经酶标仪检测所得结果超过设定的临界值时结果判为阳性，即表明免疫产生了抗体或有自然感染存在。

【主要组成成份】

【自备器材】

1．酶标仪，双波长450/630nm滤光片

2．精确的微量移液器（单道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul）

3．水浴箱或恒温箱

4．微量振荡器

5．洗液吸移装置

6．一次性枪头（10ul，200ul）

7．去离子水

【样本要求】

1．本试剂检测的样本为猪血清，样本应无菌采集，2℃～8℃贮存应不超过一周，长期应在-20℃以下保存。

2．避免使用严重溶血、有沉淀物、含悬浮纤维蛋白及污染长菌及含叠氮钠血清样本。

3．样本中含有常规用量的EDTA、枸橼酸钠或肝素钠等抗凝剂不影响本实验。

【实验准备】

1．试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前，先取出置室温30min，可以获得最佳结果。.

2．样本稀释：用试剂盒提供的样本稀释液将样本作40倍稀释（即：5μl血清加195μl样品稀释液），混合均匀。

3．配制洗涤液：将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释20倍（即1ml浓缩洗涤液加19ml水），即可使用。注意：使用前要使结晶*溶解。

【检验方法】

1．加样：根据样本数量，取所需板条，检测时，设阴、阳性对照各2孔，分别加入不用稀释的阴、阳性对照血清100μl于相应孔中。其余为样本孔，每孔加100μl用样本稀释液稀释好的样本（可做单孔也可双孔检验）。

2．温育：加样后，盖上盖板膜，置37℃温育30分钟。

3．洗板：甩去孔内液体，用洗涤液注满反应板孔，静置10秒，直接甩出，洗涤3次，最后一次洗涤后拍干板内液体。

4．加酶：每孔加酶标记物100μl。

5．温育：加好酶标记物的反应板盖好盖板膜，置37℃温育30分钟。

6．洗板：同步骤3。

7．显色：每孔加显色剂100μl，振荡混匀，37℃避光反应10分钟。

8．终止：每孔加终止液50μl，振荡10秒，充分混匀，终止后即读数。

9．读数：以450nm/ 630nm双波长检测，读取各孔吸光度值（OD值）。

【结果判定】

在酶标仪上测各孔的OD值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均OD值≥1.0，阴性对照孔的平均OD值必须＜0.1；样品中抗体存在与否，或样本中抗体的相对水平的高低由S/P值决定，S/P值计算时按以下方式处理:

 S/P=(样本OD_450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示阴性对照孔平均OD_450/630值（0.05以下的数值按0.05计算），PCx(—)表示阳性对照孔平均OD_450/630值；

当样本的S/P≥0. 25时判为阳性；样品S/P值＜0.25时判为阴性；

若进行大量样本检测时，可使用试剂盒专业分析软件进行分析数据结果，该软件可登陆本公司网站下载。

【注意事项】

1．本试剂盒仅供研究使用。

2．不要使用过期的试剂盒组分，不要把不同批次的组分混合使用。

3．使用试剂盒之前，一定要仔细阅读说明书。

4 使用前，浓缩的洗涤液应恢复至室温（20～25℃），并摇动使沉淀溶解（最好在37℃水浴锅中加热5～10分钟），然后用去离子水作20倍稀释（例如：50ml的浓缩洗涤液加上950ml蒸馏水），混匀，稀释好的洗涤液在2～8℃可以存放7-10日。

5．本试剂盒应按含有传染性材料对待，试验废弃物应经121℃高压蒸汽灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。

6．微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平衡。未用完的液体试剂应盖好瓶盖，与其它配套组份放入试剂盒中于2℃-8℃避光保存。

7．应用微量移液器加入样本及试剂，并经常校对其准确性。

8．加洗涤液时应做到满而不溢，防止孔口有游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。

9．终止液有腐蚀性，若溅到皮肤或衣物上应立即用大量清水冲洗干净。

【储存条件及有效期】

于2℃～8℃避光保存，防止冷冻，有效期12个月。

【生产日期及批号】

详见包装袋和外包装盒。

实验代做服务：