口腔/咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒

Rapid Swab DNA Kit

保存条件：本试剂盒在室温储存 12 个月不影响使用效果. 蛋白酶 K 可室温运输，建议

-20℃长期保存。

产品介绍：

本试剂盒采用特制的进口 DNA 吸附柱和*的缓冲液系统，特别适合于从口腔

咽拭子中分离纯化基因组 DNA。各种来源样品裂解消化处理后 DNA 在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了 Carrier RNA 可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组 DNA 从硅基质膜上洗脱。纯化后的 DNA 无杂质和 PCR 抑制剂，可直接适用于 PCR 分析。

产品特点：

1. 配备了 Carrier RNA 用于充分收集特别微量DNA。

2. 提取的 DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括 PCR、酶切、测

序、Southern 杂交等。

注意事项：

1. 结合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低温时可能出现析出和沉淀，可以在 37℃水浴几分

钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH 值变化。

3. Carrier RNA

1） Carrier RNA 使用方法：如果起始处理量很少（口腔咽拭子上收集到的细胞很少），我们推荐使用 Carrier RNA，如果预期有较大量 DNA 产量，用户可以根据需要选择是否加入 Carrier RNA。使用时每个样品提取所需结合液 CB 中加入 1μl Carrier

RNA 储存溶液， 将结合液 CB 与 Carrier RNA 溶液充分颠倒混匀即可(结合液 CB 容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB 中加入总共需要的 Carrier RNA 混匀备用。混合液在室温 24 小时内稳定。

2） Carrier RNA 加入过多造成 DNA 洗脱液中 Carrier RNA 浓度过高，下游 PCR 反应可能受干扰，加入过少可能并不能帮助提高 DNA 产量和 PCR 敏感度，因此加入量应该在具体试验中调整以得到最-*佳效果。

自备试剂：无水乙醇

操作步骤：

提示：第--次使用前请先在 15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 无水乙醇，充分混匀，

加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭 20 次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。

注意事项：避免用手触及棉签，采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前 30 min 内应该避免进食或者饮水。

1. 用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入 2ml 离心管中，加入 400μl 裂解液 ML。

2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，56℃放置 30 min， 期间每 10 min 涡旋混匀 10 sec。

3. 加入 400μl 结合液 CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置 10 min（挤压去除拭子， 将尽可能多的裂解液转移至新的离心管中）。

如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组 DNA 产量过低, 可以在 400μl 结合液 CB

中加入 1μl Carrier RNA 储存溶液。

4. 冷却后加 200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液滴，收集所有的液体到管底。（如果周围环境高于 25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入）

5. 将上一步混合物中加入一个吸附柱 AC 中（吸附柱放入收集管中），12,000rpm 离心

30-60 sec，倒掉收集管中的废液。

6. 加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm  离心 30 sec，弃废液。

7. 加入 500μl 漂洗液 WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm  离心 30 sec，弃掉废液。

8. 重复操作步骤 7。

9. 将吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 离心 2 min，将吸附柱置于室温放置数分钟，以*晾干吸附材料中残余的漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加 20-50μl 洗脱缓冲液 EB  （洗脱缓冲液事先在 65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置 1 min，

12,000rpm 离心 1 min。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置 1 min，

12,000rpm 离心 1 min。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA 浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于 20μl，体积过小降低 DNA 洗脱效率，减少 DNA 产量。（注意:DNA 产物应保存在-20℃，以防 DNA 降解）

DNA 浓度及纯度检测

得到的基因组DNA** 片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收 得到的DNA** 片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA 应在 OD260 处有显著吸收峰，OD260 值为 1 相当于大约 50μg/ml 双链 DNA、

40μg/ml 单链 DNA。OD₂₆₀/OD₂₈₀ 比值应为 1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用灭菌水比值会偏低，因为 pH 值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

                     本产品仅供科研

                     不用于临床诊断

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