血液基因组柱式中量提取试剂盒（1-5 ml）说明书

BloodGen Midi Kit

目录号：K0541

运输条件：室温（15-25℃）。

保存条件：Buffer RBL  4℃，其他组分室温（15-25℃）保存。

组分说明

                   Cat. No.                       K0541

                   Size                              50

                   Buffer RBL                    3×250 ml

                   Buffer GR                       25 ml

                   Buffer GL                       25 ml

                   Buffer GW1（concentrate）         13 ml

                   Buffer GW2（concentrate）         15 ml

                   Buffer GE                       15 ml

                   Proteinase K                    50 mg

                   Proteinase K Storage Buffer      5 ml

                   Spin Column DL                    50

                   Collection Tube                   50

              本产品仅供科研使用，请勿用于临床诊断及其他用途  

产品简介

　　本试剂盒适用于从新鲜或冷冻全血（用柠檬酸盐、EDTA或肝素等抗凝剂处理过的

血液样品）、血浆、血清、血沉棕黄层、骨髓、无细胞体液等样本中提取总DNA，包

括基因组DNA，线粒体DNA及病毒DNA。本品可以处理1-5 ml的全血，可纯化获得大小

为100 bp到50 kb的DNA，纯化的DNA产量高、质量好，最大限度去除蛋白、色素、脂

类及其他抑制性杂质污染，可直接用于 PCR、荧光定量PCR、酶切和Southern  Blot等

实验。

产品特点

·柱式提取方法，适用于处理1-5 ml的血液基因组提取。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项

1．向Proteinase K中加入5 ml  Proteinase K Storage  Buffer使其溶解，-20℃保存。配

   制好的Proteinase K勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。

2．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA的片段较小且提取量下降。

3．本试剂盒最多可以提取1-5 ml全血样品，如需提取大量血液样本请选用血液基因组大

   量提取试剂盒（#K0544）。

4．第--次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。

5．使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请置于56℃水

   浴重新溶解。

6．如下游实验对RNA污染较敏感，可加入4 μl DNase Free的RNase A（100 mg/ml），

   RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：K0601。

7．试剂盒中的Buffer RBL浑浊后不能继续使用。

操作步骤

1．向离心管（自备）中加入1-5 ml血液样品，加入3倍体积的Buffer RBL轻轻涡旋或颠

   倒混匀。

2．3000 rpm离心10分钟，小心吸弃上清。

3．向沉淀中加入400 μl Buffer GR，重悬沉淀。

   注意：如果下游试验对RNA敏感，可加入4 μl  RNaseA（100mg/ml）溶液，震荡15秒，室温放置5分钟。

4．1-2ml血液样本提取时,向以上溶液中加入40 μl  Proteinase K，混匀；2-5ml血液样

   本提取时,向以上溶液中加入100 μl Proteinase K，混匀。

5．加入400 μl Buffer GL，颠倒混匀15次，剧烈涡旋震荡至少1分钟。

   注意：不要直接将Proteinase K直接加入到Buffer GL。

6．70℃孵育10分钟，其间颠倒混匀数次。

   注意：1）如溶液未*清亮，补加适量Proteinase K，孵育。延长孵育时间至溶液*清亮为止。

   2）孵育10分钟DNA的产量已经达到最大，继续延长孵育时间对DNA产量和纯度没有影响。

7．加入400 μl无水乙醇，颠倒混匀10次。短暂离心，使管壁和管盖上液体集中到管底。

8．将上步所得到的溶液全部加入到已装入收集管（ Collection Tube）的吸附柱（Spin

   Column DL）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。10,000 rpm（～8,000 x g）

   离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

9．向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1（使用前检查是否加入无水乙醇），10,000 rpm

   离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

   注意：如果提取样品是小鼠或猴子等血红素难以除去的种属的血液基因组，建议重复步骤9。

10.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2（使用前检查是否加入无水乙醇），10,000 rpm

离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

   注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤10。

11.10,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以*晾干。

   注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、PCR等）。

     12.将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200 μl Buffer GE

或灭菌水，室温下放置2-5分钟，10,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。

         注意：1）如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5（可以用NaOH将水的pH值调到此范围），pH值低于7.0时洗脱效率不高。

2）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。

3）用另外的50-200 μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。

4）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤12所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，10,000 rpm离心1min；若洗脱体积小于200 μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1 μg，推荐用50 μl Buffer GE或灭菌水洗脱。

5）因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

     相关产品信息

目录号           产品名称

K0688        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+)

K2362        Es Taq DNA polymerase (with Mg   2+, 2.5mM dNTP)

K0690        2×Es Taq Master Mix (含染料)

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