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选择免疫沉淀CHIP的抗体要注意哪些事项
点击次数:1197 更新时间:2022-01-21
  染色质免疫沉淀技术(ChromatinImmunoprecipitation,简称ChIP)是研究活体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。它利用抗原抗体反应的特异性,可以真实地反映体内蛋白因子与基因组DNA结合的状况。随着对基因功能研究的不断深入,这项技术正越来越多的被应用于科研的各个领域。
  把生理状态下的细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,将与目的蛋白相结合的DNA的片段沉淀下来,然后可进行后续的DNA序列测序鉴定等。
  免疫沉淀CHIP抗体的选择要注意三点:
  一是应该选择能够做ChIP实验的抗体。尽量选择ChIP级别商业化的抗体。如没有,一般可以重组到带有标签的载体上,再转染相应的宿主(目前市面上商业化的chip抗体只有300多种,因此正好找到对应抗体较困难,可以选择标签抗体)。
  二是抗体的结合位点。选择单抗的话,尽量远离抗原和染色质相结合的位点,这样可以最大限度保证抗体和抗原的结合,而多抗可识别多个表位,可基本避免该风险。因此单多抗各有优缺点,应重点关注该抗体是否经过ChIP验证。
  三是抗体的浓度。抗体浓度的也很重要,浓度太低,不能与靶蛋白*结合。浓度太高会导致非特异性条带增加背景。

沪公网安备 31011802001676号

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