由于酶具有高度的专一催化活性，故可通过测定其相应的底物或产物浓度变化，或用某一反应产物或反应物浓度变化来确定其酶的活性。

　　一般采用电化学和光物理的方法，即利用反应物或产物的吸光性，用紫外分光光度法或荧光法测定。若酶反应过程中产物或反应物有气体，则可用测压仪(瓦氏呼吸仪)测定。若反应过程中生成酸，则可用电化学法。用同位素标记的底物则可用放射化学法测定底物浓度变化，计算酶活性。一些性质稳定的酶，也可用高效液相色谱法检测。

　　酶活性检测中可能影响的因素：

　　1.盐浓度：大多数酶不能耐受*的盐浓度。离子干扰弱离子键的蛋白质。典型的酶在1-500mM的盐浓度下具有活性。例如嗜盐藻类和细菌。

　　温度的影响：所有酶都在生物体*的温度范围内起作用。温度升高通常会导致反应速率增加。较高的温度会导致反应速率急剧下降。这是由于弱离子和氢键的分解导致的稳定了酶活性位点的三维结构的蛋白质结构的变性（改变）。人体酶的温度通常在35到40°C之间。人类的平均温度是37°C。人体酶在高于40°C的温度下开始迅速变性。来自嗜热的酶在温泉中发现的古菌在高达100°C时稳定。酶反应的“最佳”速率的想法是不合理的，因为在任何温度下观察到的速率是两种速率，反应速率和变性速率的乘积。

　　2.pH的影响：大多数酶对pH敏感并且具有特定的活性范围。都具有最佳pH值。pH可以通过破坏离子键和氢键使酶的三维形状变性（改变）来阻止酶活性。大多数酶的pH值在6到8之间;然而，胃中的胃蛋白酶在pH值为2时效果好，胰蛋白酶在pH值为8时效果好。

　　3.底物饱和度：增加底物浓度可提高反应速率（酶活性）。然而，酶饱和度限制了反应速率。当大多数时间所有分子的活性位点都被占据时，酶就会饱和。在饱和点，无论添加多少额外的底物，反应都不会加速。反应速率图将趋于稳定。