PAS(Periodic Acid-Schiff)糖原染色是一种常用于组织学和病理学领域的染色技术。它通过特定的化学反应,将组织中的糖原着色为紫红色,从而可以清晰地观察和评估细胞内糖原的分布和含量。本文将介绍PAS糖原染色的原理、实施步骤以及其在医学诊断和科学研究中所起到的重要作用。
PAS(Periodic Acid-Schiff)是一种经典的组织染色方法,最早由Schiff于1867年发明。该方法通过氧化剂与碱性条件下还原性物质之间产生显微观察可见颜色反应来显示有机物结构。在PAS糖原染色中,主要目标就是观察和评估组织样本中存在的糖原含量。
PAS糖原染色主要依赖于两个关键步骤:周期酸氧化和Schiff试剂还原。2.1周期酸氧化:首先,组织样本被经过一定时间的周期酸处理。周期酸(Periodic Acid)能够选择性氧化糖原中的羟基,将其转化为醛基。2.2 Schiff试剂还原:接下来,在周期酸处理后,样本通过Schiff试剂进行染色。Schiff试剂通常由亚硫酸与伊红反应而成。它可以还原周期酸氧化产生的醛基,并形成紫红色沉淀。
PAS糖原染色步骤3.1取得组织样本:首先,需要取得要进行PAS糖原染色的组织样本。3.2固定和包埋:将组织样本固定在适当的固定液中,并进行脱水和包埋。3.3制备切片:使用微型切片机或手工切片方法制备薄切片。3.4染色操作:3.4.1去蜡:将切片浸入去蜡溶液中,去除包埋时所使用的蜡质。3.4.2去水和再度水合作用:通过浸入不同浓度乙醇溶液使组织脱水,然后使用去离子水进行再度水合作用。3.4.3周期酸氧化:将切片浸入周期酸溶液中,在适当的温度和时间下进行氧化反应。3.4.4再次洗涤:使用去离子水对切片进行洗涤以去除多余的周期酸溶液。3.4.5 Schiff试剂染色:将切片浸入Schiff试剂中,使其与被周期酸氧化的糖原发生反应形成紫红色沉淀。3.4.6洗净和固定:使用流动的自来水冲洗切片,并继续在硼酸缓冲液中浸泡一段时间以稳定染色结果。