土壤酸性转化酶 (S-AI) 活性检测试剂盒
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
规格：50T/24S
产品内容：
试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 25mL 试剂一充分溶解备用；用不完的试剂 4℃保存； 试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存，10mg 无水葡萄糖。临用前加入 1mL 试剂一溶解,制备 10mg/mL 葡萄糖标准液备用。
产品说明：
S-AI 在 pH 为 4.5~5.0 (酸性) 条件下催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖，是土壤微生物蔗 糖代谢关键酶之一。
S-AI 催化蔗糖降解产生还原糖，进一步与 3,5－二硝基水杨酸反应，生成棕红色氨基化合物， 在 540nm 有特征光吸收，在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 AI 活性成正比。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水、甲苯。
操作步骤：
一、样品处理：
新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干，过 30~50 目筛。
二、测定步骤及加样表：
1 、分光光度计/酶标仪预热 30min ，波长调至 540nm ，蒸馏水调零。
2 、标准液的稀释：将 10mg/mL 葡萄糖标准液用试剂一稀释至 4 、3 、2 、1 、0.8 、0.6 mg/mL 的葡萄糖标准溶液备用。
3 、加样表：
试剂名称 | 测定管 | 对照管 | 标准管 | 空白管 |
土样 (g) | 0.1 | 0.1 | - | - |
试剂一 (μL) | - | 800 | - | 800 |
试剂二 (μL) | 800 | - | - | - |
标准液 (μL) | - | - | 800 | - |
甲苯 (μL) | 20 | 20 | 20 | 20 |
混匀，37℃准确水浴 1h 后，煮沸 10min 左右 (盖紧，以防止水分散失) ，流水或冰浴冷 | ||||
却后充分混匀 (以保证浓度不变) ，10000rpm，常温离心 10min，取上清 150μL 与 600μL 试 剂一混合即将上清液稀释 5 倍。 | ||||
上清稀释液 (μL) | 700 | 700 | 700 | 700 |
试剂三 (μL) | 300 | 300 | 300 | 300 |
混匀，煮沸 10min 左右 (盖紧，以防止水分流失) ，流水冷却后充分混匀，540nm 处蒸馏水调
零，记录各管吸光值A ，记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算ΔA=A 测定管-A 对照 管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。
三、S-AI 活性计算：
1 、 标准曲线的绘制：
以葡萄糖浓度为 x 轴，相应的ΔA 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b；将ΔA 带 入公式得到 x ( mg/mL)
2 、 S-AI 活性计算
单位定义：37℃每 g 土壤每天产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
S-AI (U/g) =x×V 酶促÷W÷T
V 酶促：酶促反应总体积，0.820mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间：1/24d；
注意事项：
1 、如果加入试剂三，煮沸 10min 后有混浊物出现，建议离心除去沉淀 (10000rpm ，2min ) ，取上 清测定吸光度；
2 、如果吸光值大于 1 ，可以将上清液再进行稀释；若吸光值较小，可以减少上清液稀释倍数。两种 操作均要注意改变公式中的稀释倍数。
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