土Solid- Catalase    S- CAT   

微量法

注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定

规格 ： 100T/48S

产品内容：

试剂一：液体 × 1  瓶，4℃保存； 临用前加入29 .7mL  蒸馏水充分溶解后待用；用不完的试剂4℃ 保存；

试剂二：粉剂× 1  瓶，4℃保存；临用前加入1mL  蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存； 试剂三：液体× 1  瓶，4℃保存。

产品说明：

S-CAT  是土壤微生物代谢的重要酶类，在H2O2 清除系统中具有重要作用。

H2O2   在240nm  下有特征吸收峰，通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化，即可 反应S-CAT  活性的高低。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板 (UV 板) 和蒸馏水

操作步骤：

-、     样品处理：

新鲜土样自然风干或 37  度烘箱风干，过 30~50   目筛。

、   测定步骤：

1 、  分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm ，蒸馏水调零。

2 、 加样表

试剂名称测定管无基质管无土管

风干土样 (g)0.030.03

试剂一 (μL)260260

双蒸水 (μL)260

25℃振荡培养 20min

试剂二 (μL)101010

混匀 8000g ，25℃离心 5min ，取全部上清

试剂三 (μL)303030

混匀，取200uL  至微量石英比色皿或96  孔板中，240nm  处记录各管吸光值A。 注意：  每个测定管要设一个无基质管，无土管只要做一管。

三、      S-CAT 活性计算：

A 、用微量石英比色皿测定的计算公式如下

单位的定义：每天每g  风干土样催化1μmol H2O2   降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  无土管-A  测定管+A 无基质管)×V  反总÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T= 16.5 ×   (A  无土管-A  测定管+A 无基质管)

V  反总：反应体系总体积，3 × 10-4 L ；ε  ：过氧化氢摩尔消光系数，4.36× 104 L / mol /cm；d： 比

色皿光径，1cm；  T ：反应时间，20 min= 1/72d；  W：样本质量，0.03g。

B 、用96 孔板测定的计算公式如下

单位的定义：每天每g  风干土样催化1μmol H2O2   降解定义为一个酶活力单位。

计算公式：S-CAT   (μmol/d/g) ＝[(A  无土管-A  测定管+A 无基质管)×V  反总÷   ( ε×d) × 106]÷W÷T=33 ×   (A  无土管－A  测定管+A  无基质管)

V  反总：反应体系总体积，3 × 10-4 L ；ε ：过氧化氢摩尔消光系数，4.36× 104 L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；  T ：反应时间，20 min= 1/72d；  W：样品质量，0.03g。

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