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ELISA在兽药残留检测中的应用
点击次数：2742 更新时间：2012-02-05
ELISA在兽药残留检测中的应用
兽药残留分析技术是复杂混合物中的痕量分析技术，现代方法通常包括样品的前处理(提取、净化、浓缩和衍生化)和 测定两部分。zui初，残留分析技术极限于化学分析法、比色法和微生物法。化学分析法和比色法缺乏专一性和敏感性，而微生物法虽然普通适用于抗菌药物的残留测定，但不易筛选到特别敏感的菌株，方法常受到其他抗菌药物的影响。薄层色谱(TLC)操作简单，结果可靠，但乃需要复杂的样品前处理，灵敏度不高。20世纪60年代后的GC 和七八十年代后的质谱(MS)、HPLC以及GC-MS、LC-MS等联用技术的飞速发展大大地提高了分析的灵敏度和分辨率，拓宽了残留分析范围。HPLC和GC等方法较之微生物法有高度的灵敏度和特异性，但设备昂贵，对实验人员也有较高的要求，分析费时而不易推广。同时它还需要复杂烦琐的样品前处理且不能同时筛选大量的样品，这对药物残留的及时监控无疑是不合适的。20世纪90年代后，免疫检测技术飞速发展，大大推动了兽药残留检测技术发展的进程，一系列免疫检测试剂盒的生产与应用加快了兽药残留分析的标准化。目前普遍应用于兽药残留分析的是酶免疫检测法，其研究过程一般包括人工抗原的合成、抗体的制备以及检测方法的建立等步骤。但绝大多数药物是小分子物质，分子量小于1KDa，没有免疫原性，必须把它交联到大分子蛋白质上制备人工抗原来获得免疫原性。因此兽药的免疫检测有其自身的特点。单克隆抗体在灵敏度和交叉反应方面都优于多克隆抗体，且具有均一性、专一性和*性等特点，有利于标准化。
内酰胺类
Rose等用头孢噻呋的水解产物去呋喃羰基头孢噻呋作为半抗原，将其原位交联到载体蛋白BSA和KLH上制备了两种人工抗原，免疫BALB/c小鼠后zui终筛选出两株单克隆抗体，cef-68和cef-116,并以之建立了检测头孢噻呋的Ci-ELISA方法，cef-68和cef-116的IC50分别为32ug/kg和0.33ug/kg,，其检测限分别为32ug/kg和0.33ug/kg。单克隆抗体对头孢噻呋有较高的选择性，交叉反应的数据表明只有少数头孢菌素与之有交叉反应，而青霉素则与之没有交叉反应。
氟喹诺酮类
Holtzapple等先将载体蛋白BSA、卵清蛋白OVA用过量的乙二胺处理后碳二亚胺法合成了cOVA-Sara和cBSA-Sara两种沙丁沙星人工抗原。以cBSA-Sara免疫BALB/c小鼠，
用cOVA-Sara作包被原筛选出了6株单克隆抗体，并以之建立了检测沙丁沙星的Ci-ELISA方法。标准曲线的IC50范围为7.3~48.3ug/kg,批内相对标准偏差11.0%(n=3),批间相对标准偏差10.8%(n=3),检测限为2 ug/kg。组织样品在10 ug/kg 、50 ug/kg、100 ug/kg的添加水平下回收率分别为132%、78%和81%。交叉反应数据表明单抗对沙丁沙星有很高的选择性。
Duan等制备了环丙沙星多克隆抗体，并建立了检测环丙沙星残留的Ci-ELISA方法，检测限为0.32ng/mL标准曲线0.32ng/mL~5000 ng/mL范围内线性关系良好，批内和批间相对标准偏差分别为5.81%和11.23%。环丙沙星在猪肉、鸡肉及牛乳中的回收率分别为75.58%、81.2%和84.5%。抗血清与思诺沙星的交叉反应率为69.8%，与金霉素、庆大霉素、青霉素、新霉素、喹乙醇和磺胺等无交叉反应。蔡勤仁等制备了恩诺沙星单克隆抗体，Ci-ELISA的zui低检测限为0.13ng/mL。
磺胺类
李喜旺等制备了6种模拟磺胺类药物母核结构的人工抗原和3种多克隆抗体，并对抗体的选择性与亲和性，免疫原与靶物质的免疫相关性和免疫反应条件进行了探讨。部分抗体对參试的9种磺胺类药物显示了高度的选择性和亲和性，其中7种药物Ci-ELISA抑制曲线，检测限低于0.01 ug/mL,并在PH=4.4~5.4的介质中亲和性zui强。Sheth等制备了多种模拟磺胺类药物母核结构的人工抗原和多克隆抗体，并以建立了检测磺胺类药物的Ci-ELISA方法。
