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口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法)
点击次数：201 更新时间：2024-07-15
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法)
【产品名称】
商品名称：口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸检测试剂盒(荧光 RT-PCR 法)
【包装规格】 50T/盒
【货
号】 XC-2010
【预期用途】
本试剂盒适用于检测的扁桃体、淋巴结等组织病变部与健康部交界处组织、全血等标本中口蹄疫病毒 RNA， 适用于口蹄疫病毒感染
的辅助诊断。
【检验原理】
本试剂盒采用 TaqMan 探针法实时荧光 RT-PCR 技术，通过设计 1 对口蹄疫病毒特异性引物，结合 1 条特异性探针，用荧光 RT-PCR
技术对口蹄疫病毒核酸进行体外扩增检测， 用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。
【试剂组成】
名
称
规
格
酶液
50μL×1 管
FMDV-U 反应液
950uL×1 管
FMDV-U 阳性质控品
50μL ×1 管
阴性质控品
50μL ×1 管
备注：不同批号的试剂盒组分不宜交叉使用。
【储存条件及有效期】
-20℃±5℃， 避光保存、运输、反复冻融≤5 次， 有效期 12 个月。
【适用仪器】
ABI 系列 、安捷伦 MX3000P/3005P、Bio-Rad 等系列荧光定量 PCR 检测仪。
【标本采集】
病死或扑杀猪，取分泌物、血液、脾脏、扁桃体、肾脏和淋巴结等
【保存和运输】
上述标本短期内可保存于-20℃， 长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月， 标本运送应采用2~8℃冰袋运输， 严禁反复冻融。
【使用方法】
1. 样品处理(样本处理区)
1.1 样本前处理
组织样品： 每份组织分别从 3 个不同的位置称取样品约 1g， 手术剪剪碎混匀后取 0.5g于研磨器中研磨， 加入 1.5mL 生理盐水后继续
研磨，待匀浆后转至 1.5mL 灭菌离心管中， 8000rpm 离心 2min， 取上清液 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中； 全血样本：待血凝固后，
取血清 100μL 于 1.5mL 灭菌离心管中。
1.2
RNA 提取
推荐采用深圳市迅测生物科技有限公司生产的 RNA 提取试剂盒(离心柱提取法/磁珠法)，请按照试剂盒说明书进行操作。
2. 试剂配制(试剂准备区)
根据待检测样本总数， 设所需要的 PCR 反应管管数为 N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照，每个测试反应体系配制如下表：
试剂
FMDV-U 反应液
酶液
用量(样本数为 N)
19μL
1μL
3. 加样(样本处理区)
将步骤 1 提取的 RNA、阳性质控品、阴性质控品各取 5μL， 分别加入相应的反应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。
4. PCR 扩增(核酸扩增区)
4.1将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内；
4.2设置好通道、样品信息，反应体系设置为25μL；
荧光通道选择： 检测通道选择 CY5 检测， 淬灭通道选择 NONE， 参比荧光选 NONE。
4.3推荐循环参数设置：
步骤
循环数
温度
时间
收集荧光信号
1
1 cycle
50℃
15min
否
2
1 cycle
95℃
3min
否
3
45cycles
95℃
15sec
否
55℃
30sec
是
5. 结果分析判定
5.1 结果分析条件设定
设置 Baseline 和 Threshold： 一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的start
值(一般可在 3~15 范围内调节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动阈值线至高于阴性对照)，
重新分析结果。
5.2 结果判断
阳性：检测通道 Ct 值≤38.0， 且曲线有明显的指数增长曲线。
可疑：检测通道 Ct 值>38.0， 且出现典型扩增曲线的样本建议重复试验，重复试验结果出现 Ct 值≤38.0 和典型扩增曲线者为阳性，
否则为阴性。
阴性：样本检测结果无 Ct 值且无明显的扩增曲线。
6. 质控标准
阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示；
阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期， 且 Ct 值≤30；
以上条件应同时满足， 否则实验视为无效。
7. 检测方法的局限性
➢ 样本检测结果与样本收集、处理、运送以及保存质量有关；
➢ 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果；
➢ 阳性对照、扩增产物泄漏， 会导致假阳性结果；
➢ 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果；
➢ 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果；
➢ 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定量检测不准确的结果；
➢ 本检测结果仅供参考， 如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。
【注意事项】
➢ 所有操作严格按照说明书进行；
➢ 试剂盒内各种组分使用前应自然融化， 完全混匀并短暂离心；
➢ 反应液应避光保存；
➢ 反应中管盖需盖紧；
➢ 使用一次性吸头、一次性手套和各区专用工作服；
➢ 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行， 以免交叉污染；
➢ 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器；
➢ 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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