大鼠抑制素A（INHA）ELISA试剂盒说明书
本试剂仅供研究使用       目的：本试剂盒用于测定大鼠血清，血浆及相关液体样本中抑制素A（INHA）的含量。
抑制素A实验原理：
  本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠抑制素A（INHA）水平。用纯化的大鼠抑制素A（INHA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入抑制素A（INHA），再与HRP标记的抑制素A（INHA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的抑制素A（INHA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠抑制素A（INHA）浓度。
抑制素A试剂盒组成：
 
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存   
说明书 1份 1份    
封板膜 2片（48） 2片（96）    
密封袋 1个 1个    
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存   
标准品：225ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存   
标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存   
酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存   
终止液 3ml×1瓶 6ml×1瓶 2-8℃保存   
浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶 2-8℃保存

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1. 标2. 准品的稀释与加样：在酶标3. 包被板上设标4. 准品孔10孔，5. 在*、第二孔中分别加标6. 准品100μl，7. 然后在*、第二孔中加标8. 准品稀释液50μl，9. 混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，10. 再在第三、第四孔分别加标11. 准品稀释液50μl，12. 混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，13. 再各取50μl分别加到第五、第六孔中，14. 再在第五、第六孔中分别加标15. 准品稀释液50ul，16. 混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，17. 再在第七、第八孔中分别加标18. 准品稀释液50μl，19. 混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，20. 再在第九第十孔分别加标21. 准品稀释液50μl，22. 混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，23. 浓度分别为150ng/L，24. 100ng/L ，25. 50ng/L，26. 25ng/L，27.  12.5ng/L）。
28. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不29. 加样品及酶标30. 试剂，31. 其余各步操作相同32. ）、待测样品孔。在酶标33. 包被板上待测样品孔中先加样品稀释液50μl，34. 然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍35. ）。加样将样品加于酶标36. 板孔底部，37. 尽量不38. 触及孔壁，39. 轻轻晃动混匀。
40. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
41. 配液：将30（48T的20倍42. ）倍43. 浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍44. ）倍45. 稀释后备46. 用。
47. 洗涤：小心揭掉封板膜，48. 弃去液体，49. 甩干，50. 每孔加满洗涤液，51. 静置30秒后弃去，52. 如此重复53. 5次，54. 拍干。
55. 加酶：每孔加入酶标56. 试剂50μl，57. 空白孔除外。
58. 温育：操作同59. 3。
60. 洗涤：操作同61. 5。
62. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，63. 再加入显色剂B50μl，64. 轻轻震65. 荡混匀，66. 37℃避光显色15分钟.
67. 终止：每孔加终止液50μl，68. 终止反应（此时蓝色立转黄色）。
69. 测定：以空白空调零，70. 450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
注意事项：
1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，2． 酶标3． 包被板开封后如未用完，4． 板条应装入密封袋中保存。
5． 浓洗涤液可能会有结晶析出，6． 稀释时可在水浴中加温助溶，7． 洗涤时不8． 影响结果。
9． 各步加样均应使用加样器，10． 并经常校对其准确性，11． 以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，12． 如标13． 本数量多，14． 推荐使用排枪加样。
15． 请每次测定的同16． 时做标17． 准曲线，18． 做复19． 孔。如标20． 本中待测物质含量过高（样本OD值大于标21． 准品孔*孔的OD值），22． 请先用样品稀释液稀释一定倍23． 数（n倍24． ）后再测定，25． 计算时请zui后乘以总稀释倍26． 数（×n×5）。
27． 封板膜只限一次性使用，28． 以避免交叉污染。
29． 底物请避光保存。
30． 严格按照说明书的操作进行，31． 试验结果判定必须以酶标32． 仪读数为准.
33． 所有样品，34． 洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
35． 本试剂不同36． 批号组分不37． 得混用。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，   
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD     
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释     
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标     
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值     
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释     
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990以上。
2.批内与批见应分别小于9%和11%
保存条件及有效期：
1.试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月
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