固相载体的选择和试剂的制备

ELISA的主要试剂为固相的抗原或抗体，酶标记的抗原或抗体和与标记酶直接关联的酶的反应底物。

1.固相载体的选择

ELISA可用许多不同类型的固相如纤维素、聚丙烯酰胺、聚苯乙烯、聚丙烯、交联葡萄糖、玻璃、硅橡胶、琼脂糖凝胶和含Fe2O3的磁性聚苯乙烯等材料，这些材料一共价键与抗原或抗体结合，但有其缺点，除含铁的颗粒外，其他材料ELISA冲洗步骤中都要离心。如果固相用微量板或微量管，大颗粒或透明小烧杯就不需要离心，这些固相都是用聚苯乙烯、聚乙烯和尼龙材料制成的。固相可以预先用r射线或紫外光处理也可以不处理。几乎所有的塑料都有吸附蛋白质的能力，一般认为聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能，抗体或蛋白质抗原吸附其上后保留原来的免疫活性。另外聚苯乙烯在ELISA测定过程中作为载体和容器，不参与化学反应，加之他的价格低廉，可制成各种形状，故被普遍采用。聚乙烯的吸附能力虽好，但因材料本身质软使操作不便，聚丙烯的吸附性能差，故聚乙烯和聚丙烯的使用都很少。聚苯乙烯经过射线照射后对蛋白质，特别是免疫球蛋白吸附性能增加，应用于ELISA双抗体夹心法可使固相上抗体量增多，但用于间接法测抗体时空白值较大。

为比较不同固相在某一ELISA测定中的优势可将阳性和阴性参考血清分别稀释后在不同的固相载体上按选择的ELISA操作步骤进行，显色后比较每孔溶液的吸光值。在哪种载体上的阳性和阴性参考血清的反应差别zui大，表明哪种固相zui为合适。

ELISA载体的形状只要有三种：小试管、小珠和微量酶标板。小试管的特点是可用作反应的容器，zui后放入分光光度计中比色。小珠一般为直径0.6cm的圆球，表面磨砂后吸附面积大大增加，如用特殊的洗涤器，在洗涤的过程中使圆珠滚动淋洗，效果更好。zui常用的载体为微量酶标板，于ELISA的产品称为ELISA板。上标准的微量酶标板是96孔微量板。

ELISA板的特点是可以同时进行大量标本的检测，并可在酶标仪上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量酶标板型的ELISA检测，包括加样、洗涤、孵育、比色等步骤，对操作的标准化极为有利。

由于酶标板在各个方面存在一些差异，因此选择的酶标板不仅需要于ELISA的酶标板，而且还要考虑板的吸附能力和各孔的均质性。良好的ELISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于材料的不同和制作工艺的差别，各种商品酶标板质量差异很大。