狗肿瘤浸润组织白细胞分离液说明书
（细胞培养及分子生物学）
【产品规格】
200ml/Kit
货号：WBC1079Z
【产品组成】
为方便广大用户使用，试剂内容如下：
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| 名称 | 产品编号 |
| 规格 |
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| A | 狗肿瘤浸润组织白细胞分离液 |
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| 200ml |
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| B | 样本稀释液（赠品） | 2010C1119 |
| 200ml |
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| C | 清洗液（赠品） |
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| 2010X1118 |
| 200ml |
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| D | F 液（赠品） |
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| F2013TBD |
| 200ml |
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| E | 红细胞裂解液（赠品） | NH4CL2009 |
| 100ml |
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| F | 说明书 |
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| 1 份 |
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【实验前准备】 |
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A． 适用仪器 |
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| zui大离心力可达 1200g 的水平转子离心机 |
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B． 耗材 |
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| 产品名称 |
| 产品货号 |
| 产地 |
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| 15ml 离心管散装 |
| 339650 |
| 美国 NUNC |
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| 15ml 离心管架装 |
| 339651 |
| 美国 NUNC |
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| 50ml 离心管散装 |
| 339652 |
| 美国 NUNC |
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| 50ml 离心管架装 |
| 339653 |
| 美国 NUNC |
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| 无菌胶头滴管或塑料滴管 |
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【检验方法】 |
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全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
- 首先制备组织单细胞悬液，制备方法详见“组织单细胞悬液制备技术”。
- 取一支 15ml 离心管，加入与制备的组织单细胞悬液等量的分离液（注：分离液zui少不得少于 5ml）。
- 用吸管小心吸取制备的组织单细胞悬液加于分离液液面上，400-500g，离心 20-30min。（注：根据组织单细胞悬液样本量确定离心条件，组织单细胞悬液量越大，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到*分离效果）。
- 离心后用吸管小心吸取所有环状乳白色细胞层（一层或两层），加入 10 ml 清洗液（产品编号：2010X1118），混匀细胞。250g，离心 10min。重复洗涤 2-3 次，即得所需白细胞。
- 如有红细胞残留请使用红细胞裂解液（产品编号：NH4CL2009）裂解红细胞，具体操作方法详见“红细胞裂解液使用说明”。
【注意事项】
- 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得*的实验结果，在取样 2h 内进行实验，样品存放时间越长，细胞分离效果越差。样品放置超过 6h 后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
- 本实验不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。
- 分离液用量大于制备的组织单细胞悬液样本时，分离效果更佳。
- 如实验后细胞得率或活性过低，请上海研谨技术以寻求帮助。
【储存条件及有效期】
18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
【参考值（参考范围）】
本实验白细胞提取率及纯度大于 80%。
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
| 红细胞 |
| 白细胞 |
| 血小板 |
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| （4.0-10.0）×109 |
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含量（个/L） | （4.0-5.5）×1012 | 中性粒细胞 | 淋巴细胞 | 单核细胞 | （1.0-3.0）×1011 |
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| 50%-70% | 20%-40% | 3%-8% |
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【相关实验技术方案】
1. 组织单细胞悬液制备技术
- 所获得白细胞的培养技术。
- 所获得白细胞的核酸提取技术。
- 所获得白细胞的鉴定方法A.流式细胞技术
- B.免疫组化技术
- C.原位杂交技术
D.PCR 技术
注：上述技术方案详情请登陆本公司搜索“细胞分离、
纯化、扩增、鉴定及生物治疗技术手册”，并在说明书项目栏下下载使用。
【可能存在的问题及解决方法】
1. 由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
出现情况 | 出现原因 | 建议解决方案 |
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离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层 | 转速过小或离心时间过短 | 适当增减转速 |
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离心后目的细胞存在于分离液中 | 转速过大或离心时间过长 | |
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离心后白环层弥散 | 细胞密度过大 | 调整细胞密度 |
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离心后白环层太浅或看不见 | 细胞密度过小 | |
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- 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。
- 本分离液依照标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可
能出现红细胞沉降不*的情况，可以适当加大离心转速。
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到*分离效果，
离心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。
