炭疽杆菌（BA）核酸检测试剂盒（荧光-PCR 法） |
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炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法) 【产品名称】 将步骤 1 提取的 DNA、阳性质控品、阴性质控品各取 4μL，分别加入相应的反 应管中，盖好管盖，混匀，短暂离心。 通用名称：炭疽杆菌(BA)核酸检测试剂盒(荧光-PCR 法) Name ：Bacillus Anthracis Detection Kit (Real-Time PCR Method) 4 扩增（核酸扩增区） 4.1 将待检测反应管置于荧光定量 PCR 仪反应槽内； 4.2 设置好通道、样品信息，反应体系设置为 25μL； 荧光通道选择： 检测通道（Reporter Dye）FAM， 淬灭通道（Quencher Dye） NONE，ABI 系列仪器请勿选择 ROX 参比荧光，选择 None 即可。 【包装规格】48T/盒 【预期用途】 炭疽是由炭疽杆菌（Bacillus Anthracis, BA）感染引起的一种人兽共患病。BA 在环境中形成芽孢，可长期、稳定地存在于自然界中。由于 BA 的稳定性及其致 病性，易引发突发公共卫生事件。目前的 BA 检测方法主要基于病原体的培养、染色 镜检、血清学检测等，但这些方法均不适合早期的快速侦检。基于核酸检测的荧光-PCR 技术，因其灵敏度高、操作简单、特异性好，可快速检测炭疽病原，及时控制炭疽疫 4.3 推荐循环参数设置： 步骤 循环数 温度 95℃ 94℃ 55℃ 时间 收集荧光信号 1 1 cycle 10min 15sec 30sec 否 否 是 情 [1] 。 2 40 cycles 本试剂盒适用于检测皮肤水泡液、咽拭子、可疑食物等样本中的炭疽杆菌，用于 炭疽杆菌感染的辅助诊断。 5 结果分析判定 6.1结果分析条件设定 【检验原理】 [2-3] ，用荧光 PCR 技术对炭疽 设置 Baseline 和 Threshold：一般直接按机器自动分析的结果分析，当曲线出现 整体倾斜时，根据分析后图像调节 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范围内调 节)、stop 值(一般可在 5~20 范围内调节)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖动 阈值线至高于阴性对照)，重新分析结果。 本试剂对炭疽杆菌特异性基因设计引物和荧光探针 杆菌的核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。 【试剂组成】 名 称 格 7结果判断 核酸提取液 酶液 1.5mL×2 管 50μL×1 管 1.0mL×1 管 50μL×1 管 250μL×1 管 阳性：检测通道 Ct 值≤35.0，丏曲线有明显的指数增长曲线。 可疑：检测通道 Ct 值>35.0，丏出现明显扩增曲线的样本建议重复试验，重复试 验结果出现 Ct 值≤35.0 和明显扩增曲线者为阳性，否则为阴性。 阴性：样本检测结果无 Ct 值丏无明显的扩增曲线。 BA 反应液 BA 阳性质控品 阴性质控品 8 检测方法的局限性 注： 1）不同批号试剂不能混用。 Ø 样本检测结果不样本收集、处理、运送以及保存质量有关； Ø 样本提取过程中没有控制好交叉污染，会出现假阳性结果； Ø 阳性对照、扩增产物泄漏，会导致假阳性结果； Ø 病原体在流行过程中基因突变、重组，会导致假阴性结果； Ø 不同的提取方法存在提取效率差异，会导致假阴性结果； Ø 试剂运输，保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，出现假阴性或定 量检测不准确的结果； 2）试剂盒内各试剂组份足够包装规格所标示的检测次数。 【储存条件及有效期】 -20℃±5℃，避光保存、运输、反复冻融数不超过 5 次，有效期 12 个月。 【适用仪器】 ABI 、安捷伦 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列 荧光定量 PCR 检测仪。 Ø 本检测结果仅供参考，如须确诊请结合临床症状以及其他检测手段。 9. 质控标准 【标本采集】 阴性质控品：无明显扩增曲线或无 Ct 值显示； 阳性质控品：扩增曲线有明显指数生长期，丏 Ct 值≤32； 以上条件应同时满足，否则实验视为无效。 皮肤炭疽，取水泡液 1mL；肺炭疽，采集咽拭子标本，放入标本采集管中；肠炭 疽，取粪便 1g 【保存和运输】 上述标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-70℃，但不能超过 6 个月，标本 运送应采用 2~8℃冰袋运输，严禁反复冻融。 【注意事项】 Ø 所有操作严格按照说明书进行； Ø 试剂盒内各种组分使用前应自然融化，*混匀并短暂离心； Ø 反应液应避光保存； 【使用方法】 1. 样品处理（样本处理区） Ø 反应中尽量避免气泡存在，管盖需盖紧； Ø 使用一次性吸头、一次性手套和各区与用工作服； Ø 样本处理、试剂配制、加样需在不同区进行，以免交叉污染； Ø 实验完毕后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器； Ø 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照《微生物生物医学实验室生物安全通 则》进行处理。
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