ELISAS实验血清的制备

（2）抗血清的制备

 ① 所需的抗原量   一般1-10mg/mL。

②免疫途径   抗原的注射方法有皮下注射、肌肉注射、腹膜内注射、静脉注射和淋巴结注射等。其中以静脉注射zui为简单方便，不需要佐剂乳化，产生抗体的高峰值出现较早，一般在一周左右，注射后一周即可采血测试效价。免疫过程中应注意：a.佐剂只能现配现用：b.采血时间不宜拖得太长。因为免疫时间越长，产生交叉反应的抗体也越多。

③抗血清的分离   当得到满意的效价时，即可进行取血。将收集到的血液成斜面放置在37℃、温箱中2h。然后置于4℃冰箱过一夜。次日用滴管吸取抗血清，用离心法（2000-3000r/min,20min）去掉沉淀。然后测定效价、鉴定纯度。纯度用紫外分光光度计或Folin氏比色法进行测定。抗血清保存于-25℃低温处。

 ④抗血清的效价测定    测定的方法一般有两种，即试管沉淀法和免疫双扩散法。对于免疫酶技术使用的抗血清，必须具有一定的效价，试管沉淀法应不低于1:2，免疫双扩散法不低于1:2，且要求单价抗血清。

 （3）捕食者的收集和准备     主要方法有3个：①将胃内含物挤在质量好的滤纸上，但蛋白质易与纤维素结合，若保存过久则难以洗脱：②将待检查的捕食封闭在明胶胶囊内，并加干燥剂，以使虫体与胶囊分离：③尽可能快地将采集到的捕食者储存于低温下（如-40℃）。前两种方法适于邮寄和长途运输，后一种方法能保存较长的时间。所有的方法都需保持干燥。对较大的捕食者，可将消化道分离，像蚁、蜗牛以及蜘蛛等小型动物则整个虫体。（4）酶联抗体的制备  按戊二醛简易法进行。