| 更新时间： | 2021-01-12 |
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| 厂商性质： | 生产厂家 |
提供商: 上海研谨生物服务名称: 真核表达载体构建实验流程规格: 实验服务 价格： 3000元收费标准/服务周期/提供结果:欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!
真核表达载体构建实验服务
一.服务介绍
分子克隆是在分子水平上提供一种纯化和扩 增特定DNA**片段的方法。常含有目的基因,用体外重组方法将它们插入克隆载体，形成重组克隆载体,通过转化与转导的方式，引入适合的寄主体内得到复制与扩增，然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体，可以得到插入DNA的许多拷贝，从而获得目的基因的扩增。
二、实验原理
外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种: T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌DNA连接酶。两种DNA连接酶都有将两个带有相同粘性末端的DNA分子连在--起的功能， 而且T4噬菌体DNA连接酶还有一种大肠杆菌连接酶没有的特性，即能使两个平末端的双链DNA分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低，一般可通过提高T4噬菌体DNA连接酶浓度或增加DNA浓度来提高平末端的连接效率。T4噬菌体DNA连接酶催化DNA连接反应分为3步:首先，T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶- AMP复合物;然后,酶一AMP复台物再结合到具有5磷酸基和3羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化;后产生一个新的磷酸二酯键， 把切口封起来。
DNA重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法，为了防止载体本身的自连，可以通过(牛小肠碱性磷酸酶)CIP处理克服。
连接反应的温度在37°C时有利于连接酶的活性但是在这个温度下，粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度，即12-16°C， 连接12-16h(过夜), 这样既可大限度地发挥连接酶的活性，又兼顾到短暂配对结构的稳定。
三、实验流程
1.目的DNA的扩增和纯化;
2.连接反应;
3.电泳检测连接产物。
四、客户提供
样本DNA，基因序列,试剂盒。
五、公司提供
构建好的载体，电泳胶图，测序结果。
实验代做服务：
免疫组化IHC染色实验服务 | 细胞、组织TUNEL凋亡染色实验服务 | 试剂盒免费代检测 | 实验室代做实验项目
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透射电镜服务实验服务 | 石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡 | 核仁组成区嗜银-AGNOR染色实验服务 | 免疫共沉淀（CHIRP）实验 |
RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验代做 | 酶联免疫（ELISA）技术服务 | 鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体诊断试剂盒 | 喹诺酮类快速检测试剂盒 |
组织芯片/微阵列定制技术服务
| 染色质免疫沉淀分析(CLIP)实验服务
| 多因子液相芯片技术（Luminex）实验 | 免疫细胞化学ICC实验服务 |
ATP/ADP检测实验服务 | 蛋白双向(2-D)电泳实验服务 | 蛋白相互作用分析 | 碱性磷酸酶染色实验服务 |
PKC活性检测实验 | 非标定量实验 （Label-free）
| DIGE技术实验服务 | 端粒酶活性检测实验 |
细胞生长曲线的测定 | 扫描电镜服务 | NF-KB p65活性检测实验
| 慢病毒包装实验服务 |
