| 更新时间： | 2016-06-28 |
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| 厂商性质： | 生产厂家 |
犬狂犬疫苗抗体酶联免疫分析elisa价格公道、*，售后服务完整，并提供免费代检测服务！组胺本试剂盒用于测定犬血清，血浆及相关液体样本中组胺(Histamine)的含量。
犬狂犬疫苗抗体酶联免疫分析elisa检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定犬血清，血浆及相关
液体样本中犬狂犬疫苗抗体的含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中犬狂犬疫苗抗体水平。用纯化的犬狂犬疫苗抗原
包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入犬狂犬疫苗抗体，再与 HRP 标
记的犬狂犬疫苗抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物TMB
显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深
浅和样品中的犬狂犬疫苗抗体呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值)，
通过标准曲线计算样品中犬狂犬疫苗抗体浓度。
试剂盒组成：
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品：135ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心
20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右(2000-3000 转/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分
2
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS ，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。
操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在*、第二孔中分别加标
准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，
混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔
中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ，混匀；混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，
浓度分别为 90 ng/L，60 ng/L ，30 ng/L，15 ng/L，7.5 ng/L)。
2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品 10μl(样
品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混
匀。
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4. 配液：将 30(48T 的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的20倍)倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A50 μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
注意事项：
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
大于标准品孔*孔的 OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计
3
算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
计算：
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值
代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释
倍数，即为样品的实际浓度。
试剂盒性能：
1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为0.95 以上。
2. 批内与批见应分别小于 9%和11%
保存条件及有效期：
1. 试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
