更新时间: | 2016-06-26 |
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厂商性质: | 生产厂家 |
猴腺病毒抗体(ADV Ab)elisa检测试剂盒价格公道、*,售后服务完整,并提供免费代检测服务!腺病毒抗体试剂盒用于测定猴血清,血浆及相关液体样本中腺病毒抗体(ADV Ab)的含量。
猴腺病毒抗体(ADV Ab)elisa检测试剂盒
腺病毒抗体试剂盒用于测定猴血清,血浆及相关液体样本中腺病毒抗体 (ADV Ab)的含量。
实验原理:
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中猴腺病毒抗体 (ADV? Ab )水平。用纯化的猴腺
病毒 (ADV)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被抗原的微孔中依次加入腺病毒抗体
(ADV Ab),再与 HRP 标记的腺病毒 (ADV)抗原结合,形成抗原-抗体-抗原复合物,经
过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转
化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的腺病毒抗体 (ADV? Ab )呈正相关。用酶标仪在
450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中猴腺病毒抗体 (ADV? Ab )
浓度。
腺病毒抗体试剂盒组成:
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
标准品:135ng/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
20倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 30ml×1 瓶 2-8℃保存
腺病毒抗体样本处理及要求:
1. 血清:室温血液自然凝固 10-20 分钟,离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上
清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20 分钟后,离心
20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次
离心。
3. 尿液:用无菌管收集,离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程
中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20分钟左右(2000-3000 转/
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分
2
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS ,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS (PH7.4),用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测,其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。
腺病毒抗体操作步骤
1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔 10孔,在*、第二孔中分别加标
准品100μl,然后在*、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从*孔、第二
孔中各取100μl 分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,
混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉,再各取 50μl 分别加到第五、第六孔
中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul ,混匀;混匀后从第五、第六孔中各
取50μl 分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl,混
匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准
品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,
浓度分别为 90ng/L ,60ng/L? ,30ng/L ,15ng/L ,7.5ng/L )。
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样
品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品 10μl(样
品zui终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混
匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此
重复5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50 μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
腺病毒抗体注意事项:
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未
用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间
控制在5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值
大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定,计
算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
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6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10.? 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
计算:
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度1. 样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为0.990以上。
2. 批内与批见应分别小于 9%和11%?保存条件及有效期:
1. 试剂盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6 个月