| 更新时间： | 2016-06-29 |
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| 厂商性质： | 生产厂家 |
兔出血症病毒抗体elisa检测试剂盒价格公道、*，售后服务完整，并提供免费代检测服务！出血症病毒抗体本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中出血症病毒抗体。
兔出血症病毒抗体elisa检测试剂盒
出血症病毒抗体本试剂盒用于测定兔血清，血浆及相关液体样本中出血症病毒抗体。
实验原理：
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA )测定标本中兔出血症病毒抗体。用纯化
的兔出血症病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品中出血症病毒抗体相结合，经洗
涤除去未结合的抗体和其他成分后，再与HRP 标记的兔出血症病毒抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP 酶的催化下转化成
蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值)，
与CUTOFF 值相比较，从而判定标本中兔出血症病毒抗体的存在与否。
出血症病毒抗体试剂盒组成：
试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存
说明书 1 份 1 份
封板膜 2 片(48) 2 片(96)
密封袋 1 个 1 个
酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存
阴性对照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
阳性对照 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1 瓶 2-8℃保存
酶标试剂 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
样品稀释液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂A 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
显色剂B 液 3 ml ×1 瓶 6 ml ×1 瓶 2-8℃保存
终止液 3ml ×1 瓶 6ml ×1 瓶 2-8℃保存
浓缩洗涤液 (20ml×20倍)×1 瓶 (20ml×30倍)×1 瓶 2-8℃保存
出血症病毒抗体样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上
清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心
20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次
离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程
中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右(2000-3000 转/
2
分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞
浓度达到100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20分
钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS ，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备
用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS (PH7.4)，用手工或匀浆器
将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。分装后一份待
检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上
进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP )活性。
出血症病毒抗体操作步骤：
1. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照 2 孔、阳性对照 2 孔、空白对照 1
孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)
2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50μl 。然后在待测样品孔先
加样品稀释液 40μl ，然后再加待测样品 10μl 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不
触及孔壁，轻轻晃动混匀，
3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育30 分钟。
4. 配液：将30(48T 的20倍)倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl ，空白孔除外。
7. 温育：操作同 3。
8. 洗涤：操作同 5。
9. 显色：每孔先加入显色剂 A 50 μl ，再加入显色剂 B 50 μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟
10. 终止：每孔加终止液 50μl ，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
结果判定：
试验有效性：阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.15
临界值(CUT OFF)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.20
阴性判定：样品 OD值< 临界值(CUT OFF)者为兔出血症病毒抗体阴性
阳性判定：样品 OD值≥ 临界值(CUT OFF)者为兔出血症病毒抗体阳性
出血症病毒抗体注意事项
1．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。
2．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未
用完，板条应装入密封袋中保存。
3．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
5．底物请避光保存。
6．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm
7．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的流酸，使用时必须
3
注意安全。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6 个月
