| 更新时间： | 2021-01-19 |
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| 厂商性质： | 生产厂家 |
服务名称：免疫荧光染色操作步骤规格：切片价格：80收费标准/服务周期/提供结果:欢迎咨询详谈，我们会根据您的方案及需求制定详细的服务协议。更多实验技术服务请浏览网站其他内容,或来电详询!
免疫荧光染色实验服务
一、制片
选无自发性荧光的石英玻片或普通优质玻片，洗净后浸泡于无水乙醇和乙氧基乙烷等量混合液中。用时取出用绸布擦净。将待检样品如组织块剪成适当大小印压于玻片上。也可采用冰冻切片或石蜡切片样品。
二、固定
除研究细胞表面抗原或不稳定抗原可不固定外，--般均应固定。
固定的作用有三:
1.防止标本从玻片上脱落。
2.除去防碍抗原抗体结合的类脂，使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果。
3.固定的标本易于保存，如组织切片固定后在-20%C下可保存一年而不改变其染色特性。
标本的固定原则是:
1.不能损伤细胞内的抗原。
2.不能凝集蛋白质。
3.不能损伤细胞形态。
4.固定后应保持细胞膜的通透性，以允许抗体进入与抗原结合。
三、水洗
固定后以冷的0.01 Mol/L pH7 4PBS液浸泡冲洗，后以蒸馏水冲洗，防止自发性荧光。
四、染色
染色分直接染色法与间接染色法。
1.材料与试剂
(1)荧光抗体，稀释至应用浓度。
(2) 0.01 Mol/L pH7 .4PBS液
(3) 9份优质甘油加1份pH7 .4PBS液即为甘油缓冲液。甘油有减少非特异性荧光的作用。
(4)带盖方盘。
2. 直接染色法
(1)将固定好的玻片置于湿盘中，滴加荧光抗体染色液，以覆盖为度，加盖，37°C感做30min~45min.
(2) PBS冲洗3次，每次冲洗3 min,即3x3冲洗。
(3)蒸馏水冲洗。
(4)滴甘油缓冲液一滴，封片，荧光显微镜检查。
3.间接染色法
(1) 检查抗原:
①取固定标本，加已知的免疫血清，37°C孵育30 min。
②以PBS液3x3冲洗。
③再加荧光标记的抗抗体，37°C孵育30 min。
④PBS 3x3冲洗。
⑤H2O冲洗，凉干。
⑥加甘油缓冲液，封片、镜检。
(2)检查抗体:
①兔疫后动物的淋巴组织涂片，自然干燥，甲醇固定。
②滴加相应抗原液(按1: 100~1: 500稀释)， 37°C孵育30 min.
③PBS液3x3冲洗。
④加荧光抗体，37°C孵育30 min.
⑤PBS液3x3冲洗。
⑥水洗，干。
⑦加甘油缓冲液，封片、镜检。
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