猪伪狂犬 gE 抗体ELISA 检测试剂盒说明书
【产品名称】
英文名称:ELISA Kit for detection of antibody against Pseudorabies virus gE glycoprotein
【规格】
96T×2/盒
【作用与用途】
测定猪血清中猪伪狂犬 gE 抗体,用于伪狂犬病毒gE 基因缺失疫苗免疫猪与自然感染猪的鉴别诊断
【自备器材】
1.酶标仪,双波长 450/630nm 滤光片
2.精q的微量移液器(单道 1-100μl、0.5-10μl、多道 30-300μl)
3.水浴箱或恒温箱
4.微量振荡器
5.洗液吸移装置
6.一次性枪头(10μl,200μl)
7.去离子水
【主要组成成份】
1 | PRV-gE 抗原包被板 | 96T×2 |
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2 | 酶标记物 | 22ml | 黄色帽 |
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3 | 样本稀释液 | 50ml | 透明帽 |
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4 | PRV-gE-IgG 阴性对照血清 | 1.5ml | 绿色帽 |
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5 | PRV-gE-IgG 阳性对照血清 | 1.5ml | 红色帽 |
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6 | 显色剂 | 12ml*2 | 橙色帽 |
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7 | 终止液 | 12ml | 蓝色帽 |
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8 | 20X 浓缩洗涤液 | 50ml | 白色帽 |
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9 | 盖板膜 | 2 张 |
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10 | 说明书 | 1 份 |
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【样本要求】
1.本试剂检测的样本为猪血清,样本应无菌采集,2℃~8℃贮存应不超过一周,长期应在-20℃以下保存。
【实验准备】
1.试剂盒组分回温平衡:试剂盒组分在实验前,先取出置室温 30min,可以获得J结果。
2.样本稀释:用试剂盒提供的样本稀释液将样本作 40 倍稀释(即:5μl 血清加 195μl 样品稀释液),混合均匀。
3.阳性对照阴性对照稀释:用试剂盒提供的样本稀释液将阳性对照血清和阴性对照血清作4倍稀释(即:50μl血清加150μl样本稀释液),混合均匀。
4.配制洗涤液:将试剂盒所提供浓缩洗涤液直接用去离子水稀释 20 倍(即 1ml 浓缩洗涤液加 19ml 水),即可使用。注意:使用前要使结晶*溶解。
【检验方法】
1.加样:根据样本数量,取所需板条,检测时,设阴、阳性对照各 2 孔,分别加入稀释后的阴、阳性对照血清 100μl 于相应孔中。其余为样本孔,每孔加 100μl 用样本稀释液稀释好的样本(可做单孔也可双孔检验)。
2.温育:加样后,盖上盖板膜,置 37℃温育 30 分钟。
3.洗板:甩去孔内液体,用洗涤液注满反
应板孔,静置 10 秒甩出,洗涤 3 次,后
一次洗涤后在吸水纸上拍干。
4.加酶:每孔加酶标记物 100μl。
5.温育:加好酶标记物的反应板盖好盖板
膜,置 37℃温育 30 分钟。
6.洗板:同步骤 3。
7.显色:每孔加显色剂 100μl,振荡混匀,
37℃避光反应 10 分钟。
8.终止:每孔加终止液 50μl,振荡 10 秒,
充分混匀,终止后即读数。
9.读数:以450nm/ 630nm双波长检测,读取各孔吸光度值(OD 值)。
【结果判定】
在酶标仪上测各孔的 OD 值。检测结果有效的条件是阳性对照孔的平均 OD 值≥0.5,阴性对照孔的平均 OD 值必须<0.1;样品中抗体存在与否,或样本中抗体的相对水平的高低由 S/P 值决定,S/P 值计算时按以下方式处理:
S/P=(样本 OD450/630 值-NCx)/(PCx-NCx),
其中 NCx表示阴性对照孔平均 OD450/630 值
(0.05 以下的数值按 0.05 计算);PCx表示阳性对照孔平均 OD450/630 值;
当样本的 S/P≥0. 25时判为阳性;样品 S/P 值<0.25时判为阴性;
【注意事项】
1.本试剂盒仅供研究使用。
2.不要使用过期的试剂盒组分,不要把不同
批次的组分混合使用。
3.使用试剂盒之前,一定要仔细阅读说明书。
4.使用前,浓缩的洗涤液应恢复至室温
(20~25℃),并摇动使沉淀溶解(hao在
37℃水浴锅中加热5~10分钟),然后用去离
子水作 20倍稀释(例如:50ml的浓缩洗涤液
加上 950ml 蒸馏水),混匀,稀释好的洗涤
液在 2~8℃可以存放 7-10 日。
5.本试剂盒应按含有传染性材料对待,试验废弃物应经 121℃高压蒸汽灭菌 30 分钟,或5.0g/L 次氯酸钠等消毒剂处理 30 分钟后废弃。
6.微孔板从冷藏环境中取出时应在室温中平
衡至潮气干尽后方可拆开,未用完的微孔板须放回有干燥剂的铝箔袋并密封 2℃-8℃保存。未用完的液体试剂应盖好瓶盖,与其它配套组份放入试剂盒中于 2℃-8℃避光保存。
7.应用微量移液器加入样本及试剂,并经常
校对其准确性。
8.加洗涤液时应做到满而不溢,防止孔口有
游离酶不能洗净或各孔间的交叉污染。
9.终止液有腐蚀性,若溅到皮肤或衣物上应
立即用大量清水冲洗干净。
【储存条件及有效期】
于2℃~8℃避光保存,防止冷冻,有期
12 个月。
【生产日期及批号】
详见包装袋和外包装盒。
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